液相色譜是一種高效的分析手段,
液相色譜柱是色譜分析系統的“心臟”,由于被分析樣品種類繁多,加之樣品基質復雜,色譜柱極易被強保留物質污染。這些強保留物質通常難以洗脫,多次上樣后,聚集在柱頭端,堵塞篩板,甚至可能與填料發生相互作用導致填料變性,這會導致柱效下降,分離度降低和峰型異常等現象。因而液相色譜柱的維護是十分必要的。
要知道
液相色譜柱的壽命除了與分析的樣品和流動相以及使用頻率有關外,主要的是與日常維護密切相關。由于衡量其壽命主要看柱效和柱壓,因此消除引起柱效降低和柱壓升高的因素成為延長色譜柱壽命的關鍵。具體維護注意如下:
1、流動相的PH:由于色譜柱硅膠基質填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動相的PH值超出范圍會導致基質溶解和碳鏈斷裂,使得柱效下降,并且無法恢復,因此需嚴格控制流動相的PH。
2、去除樣品和流動相中的固體顆粒:固體顆粒會堵塞色譜
柱篩板,不僅會導致柱壓升高,同時由于堵塞會引起液流不均勻,導致色譜峰拖尾,變寬,分叉等現象,從而使柱效下降。因此分析前對樣品和流動相的超聲和過濾處理是必須的步驟。尤其對加了緩沖鹽的流動相更要注意。
3、正確使用緩沖鹽:緩沖鹽可以提供離子平衡的反離子,
并使流動相保持一定的離子強度和PH值,減少拖尾。緩沖鹽易溶于水,不溶于有機溶劑,因此不當使用會致其析出,堵塞色譜柱,同時阻礙鍵合硅膠的碳鏈自由舒展,使色譜柱保留能力下降,柱效降低。正確使用緩沖鹽目的就是防析出,總結成一句就是---使用前要過渡,使用后要沖洗。
4、每次做完分析,都要進行沖洗,分析用活動相中若無酸、堿、鹽類物質,建議用90%甲醇沖洗30~60min;若分析用活動相中含以上物質,要先用10%甲醇(或用與分析用活動相同比例,把含酸、堿、鹽溶液換成水)沖洗1小時左右,再梯度走到90%甲醇沖洗30~60min(若用多元泵)。有必要時再循環幾次,可以適當縮短時間。若長時間不用該色譜柱,要沖洗好后,用純甲醇或乙腈封存。